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無菌實(shí)驗(yàn)室又稱潔凈室、潔凈室或潔凈室，無菌實(shí)驗(yàn)室的主要功能是控制室內(nèi)污染。沒有無菌實(shí)驗(yàn)室，就不可能批量生產(chǎn)污染敏感零件。無菌實(shí)驗(yàn)室定義為具有空氣過濾、分配、優(yōu)化、建筑材料和設(shè)備的房間，其中使用特定的常規(guī)操作程序控制空氣懸浮顆粒的濃度，以達(dá)到適當(dāng)?shù)念w粒清潔度水平。下面詳細(xì)列出了各區(qū)域的詳細(xì)技術(shù)操作和試劑。

1.樣品制備區(qū)

該區(qū)域?qū)ｉT用于樣品制備。制備和操作核酸提取試劑時(shí)應(yīng)采取預(yù)防措施：

1） PCR產(chǎn)物和帶有待擴(kuò)增序列的DNA克隆不能在這個(gè)房間內(nèi)操作。

2） 將組織培養(yǎng)物、組織樣品和血清樣品帶入樣品制備室進(jìn)行處理，根據(jù)應(yīng)用需要提取DNA或RNA。

3） 用于樣品處理的東西不能用作一般的分子克隆，也不能用作操縱目標(biāo)序列。

4） DNA樣本應(yīng)使用特殊的保護(hù)性或正壓活塞吸管進(jìn)行操作，以防止氣溶膠在羅氏樣本中傳播。

5） 大容量樣品應(yīng)使用無菌一次性移液管包裝。

6） 在打開管道之前，應(yīng)進(jìn)行短暫的離心，以減少氣溶膠的發(fā)生，且管道不得因用力而破裂，從而導(dǎo)致氣溶膠。

7） 任何時(shí)候都要穿實(shí)驗(yàn)服和戴手套。應(yīng)經(jīng)常更換手套，尤其是在提取過程的每個(gè)步驟。實(shí)驗(yàn)服應(yīng)在樣品制備室專門使用，并經(jīng)常清洗。

2.樣品制備和rna pcr

rna pcr的額外步驟需要額外的樣本操作，這增加了樣本間污染的機(jī)會(huì)。為防止此問題，可在樣品制備區(qū)域執(zhí)行反轉(zhuǎn)錄步驟。

3.前PCR區(qū)

有一個(gè)專門用于準(zhǔn)備各種反應(yīng)的區(qū)域。該區(qū)域保持清潔，不受克隆和樣品制備的污染。在預(yù)PCR區(qū)域配備試劑和制劑，特別是在預(yù)PCR區(qū)域?qū)ｉT使用的正壓活塞移液管。

4.PCR實(shí)驗(yàn)室試劑的操作

1） 使用的所有溶液應(yīng)無核酸和/或核酸酶（DNase和RNase）污染。

2） 所有PCR試劑中使用的水應(yīng)為高質(zhì)量的新鮮蒸餾去離子水，經(jīng)0.22μM過濾和高壓滅菌。

3） 對(duì)于在20℃至25℃下儲(chǔ)存的試劑，建議添加一些抗菌劑，如疊氮化鈉。在擴(kuò)增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%疊氮化鈉不會(huì)克制擴(kuò)增反應(yīng)。

4） 所有使用的試劑應(yīng)大批量生產(chǎn)。進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，看看試劑是否符合要求，然后將其包裝成只夠一次使用的量，以便儲(chǔ)存。

5） 所有試劑和樣品的制備均應(yīng)使用一次性滅菌瓶和試管。

6） 在使用新試劑制備新樣本之前，應(yīng)對(duì)其進(jìn)行測(cè)試。

7） 樣品制備和PCR前區(qū)域使用的移液管在不使用時(shí)應(yīng)小心保存。